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毛细管电泳仪的操作莫大意,要注意这些细节

发布时间:2021-01-21浏览:154次

   毛细管电泳仪的操作莫大意,要注意这些细节

  毛细管电泳仪是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分析技术,是分析科学中继液相色谱之后的又一重大进展,它使分析科学得以从微升水平进入纳升水平,并使单细胞乃至单分子分析成为可能,使长期困扰我们的生物大分子如蛋白质的分离分析也因此有了新的思路。该仪器可用于对有机化合物、无机离子、中性分子、手性化合物、蛋白质和多肽、DNA和核酸片段的分析。广泛应用于环境保护、生物化学、医学卫生、临床检测、司法、食品卫生、药品检测、农业化学等领域。
  分析原理:
  检测原理基于被测组分和背景电解质的吸光度不同,当被测组分通过检测窗时,吸光度发生的变化服从朗伯-比尔定律,即在一定的实验条件下,吸光度与被测组分的浓度成正比。
 

毛细管电泳仪

  毛细管电泳仪对进样技术要求很高,进样操作事项如下:
  1、进样区带越小越好:
  无论采用何种进样方式,毛细管插入样品溶液的深度一般要少于毛细管总长度的1%~2%,以尽量减少样品溶液经毛细吸附进入毛细管而影响进样量的性。样品管中溶液少为5μL,进样体积为1~50nL。
  2、进样时间以短为宜:
  通常进样时间为0.5~1s,此时毛细管粘附的样品量相对于吸入的体积可忽略不计。虽然进样时间可至±0.1s,但由于毛细管插入样品管时不可避免地会粘附一些溶液,进样时间过短会影响分析的重复性。
  3、样品预浓缩:
  受毛细管内总体积的制约,对于浓度很稀的样品,不能像HPLC那样可加大进样量来提高检测灵敏度,但可采取一些措施来改善。
  4、毛细管插入样品溶液后,应立即开始进样操作,完成后迅速移至缓冲液中开始电泳。否则会产生毛细作用和虹吸现象,引起误差并使谱带展宽。
  5、电极不要和毛细管接触,样品贮器和缓冲液贮器液面的高度应保持平衡。
  6、使毛细管电泳仪尽可能保持恒温。因温度直接影响粘度,而影响进样量的恒定。

 

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