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荧光分光光度计的基本测定流程

发布时间:2021-03-30浏览:257次

   荧光分光光度计的基本测定流程

  荧光分光光度计是一种常用的光度计产品,主要用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱,被广泛用于多个行业中。今天我们主要来介绍一下它的基本特点及操作,希望可以帮助用户更好的应用产品。
  它能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。能够对经光源激发后产生荧光的物质或经化学处理后产生荧光的物质成份分析,可应用于生物化学、生物医学、环境化工等部门,可以说是有很重要的用途。
  基本测定:
  (1)荧光激发光谱测定
  设置荧光分光光度计参数,扫描发射波长,找到maxλem,以此为发射波长,记录发射强度作为激发波长的函数,便得到激发光谱。
  (2)荧光发射光谱测定
  设置仪器参数,扫描激发波长,找到maxλex,以此为激发波长,记录发射强度与发射波长间的函数关系,便得到荧光发射光谱。
  (3)差谱测定
  设置仪器参数,选择合适的工作方式,测定背景溶液的发射光谱并储存起来,在一定的工作方式下,扫描样品溶液的发射波长,得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值,即差谱。
  (4)峰面积积分
  选择适当的工作方式,对样品溶液进行积分操作,即得到峰面积积分。
  (5)荧光强度
  选择合适的测量参数,设置λex、λem,采用定点读数或扫描方式,即可测得所选波长处的荧光强度。
  (6)定量测定
  配制一系列已知浓度的标准溶液,在一定的测定条件下,设置λex、λem,按照由稀至浓的次序,测定标准溶液的荧光强度,绘制荧光强度—浓度的工作曲线,不改变荧光分光光度计参数测定未知溶液的荧光强度,由工作曲线即可求出未知溶液的浓度。

 

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